Validação de metodologias para o estudo da lipase sensível a hormônio em vacas em lactação

Autores/as

  • Dante Pazzanese Duarte Lanna Universidade de São Paulo, ESALQ, Departamento de Zootecnia, Piracicaba, SP
  • Dale Elton Bauman Universidade Cornell, Departamento de Ciência Animal, Ithaca, NY

Palabras clave:

lipase sensível a hormônio, lipólise, ruminante, lactação

Resumen

Este trabalho objetivou: a) desenvolver técnicas para mensuração da HSL(Lipase sensível a hormônio) em tecido adiposo de vacas em lactação;e b) medir a ativação da HSL por €œsegundos mensageiros€ responsáveis pela fosforilação da HSL Utilizaram-se como substrato emulsões de trioleina radioativa (3H-trioleina). A emulsão foi preparada por sonicação em solução 0,1M de fosfato, pH= 7,0. A utilização da mistura de 2,5mg/ml de fosfatidilcolina e 1,5mg/ml de fosfatidiletanolamina como emulsificante proporcionou as maiores atividades. Obteve-se a enzima por homogeneização,centrifugação a 90.000xg, por 50 min e precipitação a pH= 5,2. Demonstrou-se linearidade da atividade em função da quantidade de enzima e tempo de reação. Obteve-se ativação da HSL in vitro com dibutiril AMP cíclico (dbcAMP), ATP, proteína quinase-A e MgCl2, sendo estes resultados os primeiros publicados na literatura, com bovinos. Para tecido adiposo de bovinos foram necessárias concentrações de 2mM de ATP e 3 μM de dbcAMP para maximizar a ativação da HSL. Estudos da cinética da HSL demonstraram que o Km da enzima bovina foi de 0,3 mM de trioleina. A ativação da HSL por dbcAMP, determinada em diversas concentrações de substrato, foi proporcionalmente maior em concentrações próximas ao Km, sugerindo que a ativação altera a interface enzima-gota de lipídeo. A metodologia parece adequada para medir a atividade da HSL e a ativação da enzima é função do aumento da afinidade da enzima pelo substrato.

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Publicado

2014-01-14

Número

Sección

FORRAGICULTURA E PASTAGENS

Cómo citar

Validação de metodologias para o estudo da lipase sensível a hormônio em vacas em lactação. (2014). Boletín De Industria Animal, 52(1), 49-56. http://bia.iz.sp.gov.br/index.php/bia/article/view/803

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