Nascimento de bezzerros clonados produzidos com fibroblastos adultos e fetais
Palavras-chave:
bovino, clonagem, fibroblasto, Nelore, transferência nuclearResumo
Este trabalho examinou a viabilidade de embriões bovinos obtidos por transferência nuclear. Oócitos foram maturados in vitro por 17 horas e enucleados após a aspiração do primeiro corpúsculo polar e da placa metafásica. Fibroblastos de uma vaca Nelore de 10 anos de idade e de um feto macho de 45 dias coletado em abatedouro foram utilizados como doadores de núcleos. Os oócitos enucleados foram fusionados com fibroblastos de origem adulta e fetal após estímulo elétrico. Após fusão elétrica, as estruturas reconstruídas foram incubadas em TCM199 acrescido de 10%de SFB e suplementado com cicloheximida e citocalasina D por 1 hora e depois mais 4 horas apenas em cicloheximida. Os embriões reconstruídos e ativados foram co-cultivados em TCM199 com células da granulosa por 7-9 dias. Um total de 569 embriões foram reconstruídos com fibroblasto adulto e 668 com fibroblasto fetal. Após a eletrofusão, 181 e 212 embriões oriundos de células adultas e fetais, respectivamente, fundiram e desses 16,6% e 15,1% chegaram ao estágio de blastocisto. Após transferir 21 e 18 blastocistos oriundos de células adultas e fetais, respectivamenet, as taxas de prenhez aos 90 dias foram 19% e 16, 7%. Não houve diferença estatística (p<0,05) entre as taxas de prenhez. Duas gestações originadas de células adultas abortaram ao 4º e 5º mês de gestação. Uma receptora que recebeu embrião de fibroblasto adulto pariu uma bezerra Nelore saudável, pesando 40kg. A outra receptora que recebeu embrião de fibroblasto adulto teve hidroalantóide e acabou parindo uma bezerra morta aos 290 dias. A primeira gestação de células fetais resultou num bezerro macho saudável, pesando 34kg (MELLO et al. 2003). Esses resultados indicaram que fibroblastos adultos e fetais de Nelore podem ser usados como doadores de núcleo, com taxas semelhantes de desenvolvimento in vitro e in vivo.
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